超微量核酸定量分析仪（如超微量核酸蛋白测定仪）对蛋白的测试主要基于紫外-可见分光光度法，通过测量蛋白质在特定波长（如280nm）的吸光度来估算其浓度。以下是其测试蛋白的具体方法及关键步骤：
一、测试原理
蛋白质分子中的色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）残基以及Cys-Cys二硫键在280nm波长处有显著吸收。仪器通过测量蛋白质溶液在280nm处的吸光度（A280），结合朗伯-比尔定律，直接计算蛋白质浓度（mg/ml）。此方法无需构建标准曲线，但需确保样品中不含其他在280nm处有强吸收的杂质（如核酸、酚类物质）。
二、操作步骤
仪器准备
连接电源，启动仪器，预热5-10分钟至稳定状态。
选择“蛋白A280”检测模式，并设置光程（通常为10mm，但仪器可能自动调整）。
使用高纯度蒸馏水或空白缓冲液进行零点校准，消除背景干扰。
样品处理
样品量：建议使用2μL样品（部分仪器支持0.5-2μL微量检测），确保形成稳定液柱。
避免气泡：点样时轻触检测孔底部，缓慢释放液体，防止气泡影响吸光度测量。
表面张力：若样品表面张力低（如含去污剂），可增加样品量至4μL以保证液柱稳定性。
空白对照
取2μL空白溶液（如缓冲液）加至下基座，放下上基座并点击“空白”按钮，记录背景吸光度。
擦拭基座，确保无残留液体。
样品检测
取2μL待测样品加至下基座，放下上基座并点击“样品”按钮。
仪器自动测量吸光度并计算浓度，结果通常以mg/ml为单位显示。
高浓度样品：若吸光值超过仪器量程（如光强<200），需稀释样品后重新检测。
数据记录与清理
保存检测结果，并导出为CSV或PDF格式。
用无尘布擦拭基座，避免交叉污染。
三、关键注意事项
基线校准
默认基线校准波长为340nm，用户可根据需要调整。
必须在样品检测前完成校准，否则光谱值将偏移，导致浓度计算错误。
样品纯度
避免样品中含核酸、酚类或高浓度盐离子，这些物质可能在280nm处产生干扰吸收。
若需检测含杂质样品，可结合比色法（如BCA、Bradford法）或使用双波长（280nm/340nm）扣除背景。
仪器维护
光源：避免长时间曝光，不使用时关闭光源以延长寿命。
单色器：定期更换干燥剂（如硅胶），防止色散元件受潮生霉。
检测器：防止强光直射或受潮积尘，保持清洁。
环境：仪器应放置在干燥、稳定的工作台上，远离空调出风口或直射阳光，温度控制在25℃±2℃。
特殊样品处理
冷凝样品：采用45度斜面贴壁缓慢加载，防止溢出或牛顿环干扰。
多糖类物质：检测后需用乙醇试剂冲洗液路，避免残留。
油脂样品：若发生上浮现象，需先低温离心分离后再检测。
四、应用场景与优势
快速定量：无需复杂前处理，2-5分钟内完成检测，适合高通量筛选。
微量检测：仅需0.5-2μL样品，节省珍贵样本（如临床标本、稀有蛋白）。
多参数分析：部分仪器支持同时检测A260（核酸）、A280（蛋白）及OD600（细菌浓度），实现多组分定量。
便携性：紧凑设计，适用于现场检测或移动实验室。
