核酸蛋白测定仪是分子生物学实验室中用于快速定量核酸（DNA/RNA）和蛋白质浓度的关键设备。正确的操作不仅能保证数据的准确性，还能延长仪器寿命。本文将为实验室新手介绍核酸蛋白测定仪的基本操作规范、常见问题及实用技巧。
一、操作前的准备工作
1.仪器校准
-空白校准：每次使用前，需用超纯水或缓冲液（如TE缓冲液）进行空白校准，以消除背景干扰。
-定期维护：若仪器长时间未使用，需重新校准，并检查光源、检测器是否正常。
2.样品准备
-核酸样品：确保无颗粒物或杂质，必要时进行离心（12,000rpm，1-2分钟）去除杂质。
-蛋白质样品：避免高浓度去污剂（如SDS），以防影响吸光度检测。
3.选择合适的检测模式
-紫外吸收法（如NanoDrop）：适用于DNA/RNA（260nm）和蛋白质（280nm）的快速测定。
-荧光法（如Qubit）：适用于低浓度核酸检测，灵敏度更高。
二、标准操作流程
1.开机与初始化
-打开仪器，预热5-10分钟（部分设备需预热更长时间）。
-选择对应的检测模式（核酸/蛋白质）。
2.加样与检测
1.清洁检测平台：用无尘纸蘸取少量超纯水或乙醇擦拭检测表面，避免残留污染。
2.加样：
-NanoDrop类仪器：滴加1-2µL样品于检测台，放下检测臂。
-比色皿型仪器：确保比色皿清洁，加入适量样品（通常50-200µL）。
3.读数：点击“Measure”，记录数据。
4.清洁：检测完毕后，立即用超纯水或乙醇清洁检测台，防止样品结晶影响后续检测。
3.数据记录与分析
-核酸纯度判断：
-DNA：A260/A280≈1.8（纯DNA），A260/A230>2.0（无污染物）。
-RNA：A260/A280≈2.0（纯RNA）。
-若比值异常（如A260/A280<1.6），可能提示蛋白质或酚类污染。
-蛋白质测定：使用Bradford或BCA法时，需制作标准曲线。
三、常见问题及解决方案
1.检测结果异常（如A260/A280比值偏低）
-可能原因：蛋白质或有机溶剂污染。
-解决方案：重新纯化样品，或改用荧光定量法（如Qubit）。
2.仪器报错（如“Sampletooconcentrated”）
-可能原因：样品浓度超出检测范围。
-解决方案：稀释样品后重新检测。
3.基线漂移或不稳定
-可能原因：检测台污染或光源老化。
-解决方案：清洁检测台，或联系工程师校准光源。
四、实用技巧
1.避免气泡干扰：加样时确保液滴完整，无气泡，否则会导致吸光度波动。
2.低浓度样品检测：
-使用荧光法定量（如Qubit），比紫外法更灵敏。
-若必须使用紫外法，可适当增加样品体积（如2µL→3µL）。
3.长期存储建议：
-每周至少开机一次，防止光学元件受潮。
-存放于干燥、无尘环境中。
